As doenças das aves apresentam-se frequentemente como infeções mistas ou secundárias, caracterizadas por sintomas clínicos e achados de necropsia que podem levar a um diagnóstico errado. A deteção laboratorial de agentes patogénicos é fundamental para acertar. O local de colheita, o método de armazenamento e as condições de transporte afetam diretamente a exatidão dos testes. Este guia aborda os aspetos essenciais da colheita e envio de amostras de aves, com especial atenção a doenças como a Doença Infeciosa da Bursa (IBD), oferecendo dicas práticas para melhorar a deteção de agentes patogénicos e a eficiência do diagnóstico.
Princípios Básicos da Colheita de Amostras
Escolha de Amostras Representativas
- Objetivo: Escolher aves moribundas ou recentemente mortas (<6 horas) com sintomas típicos que reflitam os padrões de doença do lote.
- Métodos:
- Concentrar-se em aves na fase inicial (até 3 dias) da doença, visando lesões claras (por exemplo, bursa de Fabricius inchada na IBD, hemorragia do baço).
- Colher 3–5 aves por lote para obter resultados fiáveis.
- Exemplo: Uma exploração que colheu amostras de estirpes variantes da IBD a partir da bursa de Fabricius obteve uma taxa de deteção de 90% em amostras inchadas precoces, em comparação com 50% nas atrofiadas.
Procedimentos Assépticos
- Objetivo: Evitar que germes externos contaminem as amostras, para garantir a sua limpeza e integridade.
- Procedimentos:
- Utilizar instrumentos estéreis (bisturi, tesoura, pinça) e desinfetar com álcool a 75% ou calor elevado após cada utilização.
- Colher primeiro dos locais de lesão primária (por exemplo, bursa na IBD) e só depois dos outros órgãos, para evitar contaminação cruzada.
- Usar vestuário de proteção, luvas estéreis e máscaras N95 para se proteger da exposição.
- Nota: Realizar as necropsias numa sala dedicada ou numa área de fácil desinfeção; incinerar ou autoclavar os resíduos.
Momento da Colheita
- Deteção de Agentes Patogénicos:
- Melhor Momento: Nos 3 dias seguintes ao início, quando os níveis de agentes patogénicos são elevados e a interferência de anticorpos é baixa. Por exemplo, as estirpes variantes do IBDV na bursa podem atingir 10^8 TCID50/mL precocemente.
- Evitar: Carcaças em decomposição (mais de 12 horas) ou doença em fase avançada (anticorpos elevados, menos agentes patogénicos).
- Deteção de Anticorpos:
- Anticorpos Vacinais: Recolher sangue total (coagulado), soro ou gema (20–30 amostras/lote) 3–4 semanas após a vacinação.
- Anticorpos de Diagnóstico: Colher amostras em qualquer altura, em conjunto com o historial da doença.
- Exemplo: Um teste de anticorpos da vacina contra a IBD mostrou um título de 1:16 às 2 semanas pós-vacinação, subindo para 1:128 às 4 semanas, demonstrando melhor a eficácia da vacina.
Biossegurança
- Proteção: Usar vestuário de proteção, luvas e máscaras para evitar a exposição a agentes patogénicos (por exemplo, Gripe Aviária H9).
- Ambiente: Trabalhar numa área selada e de fácil desinfeção (por exemplo, sala de necropsia com pressão negativa); autoclavar os resíduos a 121°C durante 15 minutos.
- Envio de Aves Inteiras: Se não for possível colher amostras no local, selar as carcaças, refrigerar (4°C) e entregar no prazo de 24 horas.
Armazenamento e Transporte das Amostras
- Armazenamento:
- Deteção de Agentes Patogénicos: Colocar as amostras em sacos estéreis selados, armazenar a 4°C e evitar a congelação (pode comprometer o isolamento bacteriano/viral).
- Deteção de Anticorpos: O soro ou o sangue total podem ser congelados (-20°C); a gema mantém-se a 4°C.
- Transporte:
- Utilizar transporte em cadeia de frio (incluindo acumuladores de frio e caixa isotérmica) a 4°C e entregar no prazo de 48 horas.
- Embalar o sangue total de forma segura para evitar agitação e hemólise; proteger os ovos de quebra.
- Nota: As amostras de IBDV (bursa) necessitam de armazenamento a 4°C; a congelação a -20°C pode reduzir os títulos virais em 20–30%.
Informações para o Envio
- Detalhes Necessários:
- Nome da exploração, endereço, pessoa de contacto.
- Raça de aves, dimensão do efetivo, idade, data de colheita das amostras.
- Tipo de teste (por exemplo, PCR para IBDV, ELISA para anticorpos H9).
- Historial da doença: idade de início, taxa de mortalidade, sintomas (penas eriçadas, diarreia), consumo de ração/água, produção de ovos, vacinas/medicamentos recentes (nos últimos 30 dias).
- Objetivo: Um historial detalhado ajuda a confirmar o diagnóstico. Por exemplo, casos de estirpes variantes da DII com um historial de falha vacinal sugerem uma incompatibilidade antigénica.
Locais de Colheita de Amostras em Aves
Para melhorar a deteção de agentes patogénicos, selecione locais de amostragem especificamente direcionados para a doença ou condição em investigação. Abaixo estão os locais recomendados para as doenças avícolas comuns (ampliado a partir do Apêndice 2, com foco na DII):
| Aves | Doença | Abreviatura | Locais de recolha de amostras |
| Galinha | Doença de Newcastle | ND | Baço, fígado, garganta, traqueia, pulmão, cérebro |
| Influenza Aviária (H9) | H9 | Traqueia, brônquios, pulmão, baço, rim, fígado | |
| Bronquite Infecciosa | BI | Muco traqueal, pulmão, rim, fígado, baço, oviduto, zaragatoa cloacal | |
| Doença Infecciosa da Bursa | IBD | Bursa (primária), rim, baço | |
| Laringotraqueíte Infecciosa | ILT | Exsudado traqueal, garganta, traqueia, pulmão | |
| Adenovírus Aviário | FADV | Líquido pericárdico, fígado, rim | |
| Síndrome da Queda de Postura | EDS76 | Oviduto, útero, folículos deformados, rim, fígado | |
| Varíola Aviária | POX | Traqueia, crostas das lesões | |
| Artrite Viral | ARV | Tendão, líquido articular, tonsilas cecais, intestino | |
| Anemia da Galinha | CAV | Medula óssea, fígado | |
| Leucose Aviária | ALV | Rim, fígado, nódulos das lesões, plasma | |
| Hepatite E Aviária | HEV | Fígado | |
| Encefalomielite Aviária | AE | Cérebro, medula espinal, pâncreas, intestino | |
| Doença de Marek | MD | Fígado, proventrículo, baço, rim, folículos das penas | |
| Reticuloendoteliose | REV | Fígado, proventrículo | |
| Mycoplasma Gallisepticum | MG | Saco aéreo, traqueia, pulmão, zaragatoa nasal | |
| Mycoplasma Synoviae | MS | Líquido articular, almofada plantar, zaragatoa articular, saco aéreo, traqueia | |
| Colibacilose | E. coli | Fígado, cérebro | |
| Coriza Infecciosa | IC | Muco nasal, zaragatoa nasal, material caseoso nasal | |
| Doença de Pullorum | PD | Fígado, baço, coração, rim, pâncreas, oviduto, folículos deformados, cloaca | |
| Pato | Reovírus do Pato | DRV | Baço |
| Hepatite Viral do Pato | DHV | Fígado, baço | |
| Parvovírus do Ganso | GPV | Fígado, baço, intestino, sangue | |
| Vírus Tembusu do Pato | DTV | Oviduto, folículos | |
| Adenovírus do Pato | FADV | Fígado, baço, rim | |
| Circovírus do Pato | – | Baço, timo, fígado, rim | |
| Serosite do Pato | – | Cérebro, fígado | |
| Ganso | Astrovírus do Ganso | ASTV | Rim, baço, fígado |
Notas de Amostragem de IBD:
- Local Primário: Bursa (nos 3 dias seguintes ao início, durante edema ou hemorragia), maior carga viral.
- Locais Secundários: Rim, baço (infeção precoce).
- Testes: RT-PCR direcionada à região hipervariável VP2 para confirmar mutações como 222T e 318D, combinada com histopatologia (destruição folicular, depleção de linfócitos) para verificar variantes (por exemplo, A2dB1).
Recomendações de Colheita para Estirpes Variantes da IBD
Com base em Avanços na Investigação sobre Estirpes Variantes de IBD, a amostragem para nVarIBDV requer:
- Momento: Recolher a bursa nos 1–3 dias seguintes ao início (títulos virais até 10^8 TCID50/mL); as taxas de deteção diminuem na fase de atrofia.
- Locais: Focar na bursa (1–2g/ave), complementada pelo baço (edema precoce) e rim (hemorragia menor).
- Armazenamento: Armazenar a 4°C e enviar no prazo de 24 horas. A congelação a -20°C pode reduzir a atividade viral.
- Testes: RT-PCR direcionada à HVR da VP2 para confirmar mutações como 222T e 318D, ELISA para níveis de anticorpos (4 semanas após a vacinação).
- Exemplo: Uma exploração testou a bursa de frangos de corte com 25 dias de idade, confirmou nVarIBDV (A2dB1) por RT-PCR e aumentou a proteção para 85% com uma vacina ajustada.
Estudos de Caso Práticos
- Caso 1: Deteção de Estirpe Variante da IBD
- Contexto: Uma exploração de frangos de corte no Leste da China registou redução do apetite e inchaço da bursa em frangos com 30 dias de idade, com uma taxa de mortalidade de 5%.
- Colheita de amostras: Colheram bursa (1g/ave) de 5 aves no dia 2 do início dos sintomas, armazenaram a 4°C e enviaram por cadeia de frio no prazo de 24 horas.
- Resultados: A RT-PCR confirmou nVarIBDV (mutação 318D); a mudança para a vacina recombinante VP2 atingiu 90% de proteção.
- Caso 2: Monitorização de Anticorpos contra a Gripe Aviária H9
- Contexto: Uma exploração de poedeiras verificou a eficácia da vacina H9 4 semanas após a vacinação.
- Colheita de amostras: Colheram 30 amostras de sangue total, deixaram coagular e transportaram a 4°C para prevenir a hemólise.
- Resultados: O ELISA revelou um título de anticorpos de 1:256, confirmando uma imunidade forte.
Conclusão
A colheita e submissão precisas de amostras de aves são cruciais para um diagnóstico preciso da doença, o que impacta diretamente os resultados da deteção e controlo de agentes patogénicos. Escolher as amostras certas, manter a esterilidade, cronometrar com precisão as colheitas, garantir a biossegurança, padronizar o armazenamento e o transporte e fornecer um historial detalhado da doença melhoram significativamente os resultados dos testes. Para doenças como as variantes da IBD, a colheita precisa da bursa com diagnóstico molecular (por exemplo, RT-PCR) é fundamental. As explorações devem formar o seu pessoal sobre a colheita padronizada e estabelecer redes regionais de monitorização de agentes patogénicos, utilizando tecnologias como a cultura de suspensão de células animais (conforme referido em Tecnologia de Cultura de Células Animais em Suspensão) para desenvolver vacinas mais eficazes e melhorar o controlo da doença.
Referências:
- OIE, Manual de Testes de Diagnóstico para os Animais Terrestres, 2023.
- Fan L, et al. Uma nova variante do vírus da doença infecciosa da bursa suprime a vacinação contra a doença de Newcastle. Veterinary Microbiology, 2020.
- Avicultura, Orientações para a Colheita de Amostras em Aves de Capoeira, 2024.
